【Abstract】 A novel betacoronavirus, severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), which caused a large respiratory outbreak in Wuhan, China in December 2019, is currently spreading across many countries globally. 【概要】 2019年12月に中国・武漢で大規模な呼吸器感染症を引き起こした新型ベータコロナウイルス、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS-CoV-2）は、現在世界各国で感染が広がっている。・・・
①ウイルス分離ではなく細胞培養 SARS-CoV-2 is isolatable using VeroE6, Huh7, or human airway epithelial cells (2⇓–4), but here we show that an engineered cell line, VeroE6/TMPRSS2, is highly susceptible to SARS-CoV-2 infection, suggesting the important role for TMPRSS2 in SARS-CoV-2 infection and indicating its potential utility for isolating and propagating this virus. SARS-CoV-2は、VeroE6、Huh7、ヒト気道上皮細胞（2⇓-4）を用いて分離可能であるが、ここでは人工細胞株であるVeroE6/TMPRSS2がSARS-CoV-2に非常に感受性があることを示し、SARS-CoV-2の感染におけるTMPRSS2の重要性を示唆するとともに、本ウイルス分離増殖に有用であることを示唆するものである。
②調査対象は7人の患者のみ。ゲノムはうち1人のもの Seven clinical specimens (throat swabs or sputum) obtained from seven SARS-CoV-2 infection cases were inoculated into VeroE6/TMPRSS2 cells, which were monitored daily for cytopathic effect (CPE). These clinical specimens were deidentified prior to use, and this study was approved by the ethics committee of the National Institute of Infectious Diseases, Japan (approval no. 1091). SARS-CoV-2感染者7名から得た臨床検体（咽頭を拭った綿棒または喀痰）7個をVeroE6/TMPRSS2細胞に接種し、毎日細胞毒性（CPE）を観察した。これらの臨床検体は使用前に非識別化されており，本研究は国立感染症研究所倫理委員会の承認（承認番号1091）を受けている。
追記2★2023/08/22 上の件確認しました。 Abstractにさらにこうあります⇩ In five cases among the seven, clear CPE with detachment/floating (black arrows, Fig. 1B) and syncytium formation (white arrows, Fig. 1B) developed at 2 or 3 d postinfection (p.i.) (Table 1). 7例中5例で、感染後2～3日目に剥離・浮遊（黒矢印、図1B）および合胞体形成（白矢印、図1B）を伴う明瞭なCPEが発現した（表1）。
まず7人中5人の検体でCPEが見られたとのこと。🐵細胞がﾀﾋんだわけです。 そして⇩ Next-generation sequencing (NGS) of case Wk-521 detected the nearly full-length genome sequence from SARS-CoV-2 with >99.9% homology (1, 2) (GISAID database ID EPI_ISL_408667). 症例Wk-521の次世代シークエンシング（NGS）では、99.9％以上の相同性を持つSARS-CoV-2のほぼ全長のゲノム配列が検出された(1, 2)（GISAIDデータベースID EPI_ISL_408667）。
③分離の手順に関する記載がほとんどない 今一番問題になっている分離に関する記述はこれだけです👇 Therefore, we attempted to isolate SARS-CoV-2 using VeroE6/TMPRSS2 cells, which express TMPRSS2 constitutively. そこで、TMPRSS2を構成的に発現しているVeroE6/TMPRSS2細胞を用いて、SARS-CoV-2の分離を試みた。
④「感染研新開発Vero細胞の優位性」PRが論文の中心 この論文はVeroE6/TMPRSS2細胞という感染研新開発のVero細胞の優位性PRが中心になっています。それを使用するのは細胞培養実験です。 The messenger RNA expression level of TMPRSS2 in VeroE6/TMPRSS2 cells is ∼10-fold higher than in normal human lung tissue and other human cell lines (Fig. 1A). VeroE6/TMPRSS2細胞におけるTMPRSS2のメッセンジャーRNA発現量は、正常なヒト肺組織や他のヒト細胞株と比較して約10倍高い（図1A）。
VeroE6/TMPRSS2 cells are superior to other cell lines tested in this study for SARS-CoV-2 isolation. VeroE6/TMPRSS2細胞は、SARS-CoV-2の分離において、本研究でテストした他の細胞株よりも優れている。
The viral RNA copies in the clinical specimens used for virus isolation were estimated by real-time RT-PCR (9, 10). As expected, viral RNA copies in the clinical specimens in which CPE developed within 2 d p.i. were greater than those in the other specimens (Table 1). ウイルス分離に用いた臨床検体中のウイルスRNAコピー数は，real-time RT-PCRで推定した（9, 10）．予想通り、CPEが2日以内に発症した臨床検体のウイルスRNAコピー数は、他の検体のそれよりも多かった（表1）。
However, the viral RNA copies in the VeroE6/TMPRSS2 cell culture supernatants were >100 times greater than those from VeroE6 cells (Fig. 1 D and E). しかし、VeroE6/TMPRSS2細胞の培養上清中のウイルスRNAコピーは、VeroE6細胞から得たものに比べて100倍以上大きかった（図1 DおよびE）。
The results showed that VeroE6/TMPRSS2 displayed ∼10-fold greater number of SARS-CoV-2–infected cells than the parental VeroE6 cells. その結果、VeroE6/TMPRSS2は、親細胞であるVeroE6に比べて、SARS-CoV-2感染細胞の数が約10倍多いことが分かった。
さてその新開発「VeroE6/TMPRSS2」は従来型Vero細胞より優れていると何度も強調した感染研論文、その最後はこう結ばれています👇 VeroE6/TMPRSS2 cells are easily maintained, suitable for large-scale propagation, and now available from Japanese Collection of Research Bioresources (JCRB) Cell Bank in Japan (https://cellbank.nibiohn.go.jp/english/) (JCRB no. JCRB1819). VeroE6/TMPRSS2細胞は維持管理が容易で、大規模な増殖に適しており、現在、日本研究者生物資源コレクション（JCRB）細胞バンク（https://cellbank.nibiohn.go.jp/english/）（JCRB 番号 JCRB1819）から入手可能。
シーケンス（遺伝子解析）の方も1行で片づけているとの指摘。論文のこの部分です👇 Next-generation sequencing (NGS) of case Wk-521 detected the nearly full-length genome sequence from SARS-CoV-2 with >99.9% homology (1, 2) (GISAID database ID EPI_ISL_408667). 症例Wk-521の次世代シーケンス（NGS）によりSARS-CoV-2のほぼ全長のゲノム配列が検出され、99.9%以上の相同性（1,2）を示した(GISAIDデータベースID EPI_ISL_408667)。
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